彩色馬蹄蓮的組織培養及工廠(chǎng)化生產(chǎn)

馬蹄蓮為天南星科馬蹄蓮屬多年生草本植物。地下具褐色肥大肉質(zhì)根莖，地上莖高可達lm或更高。葉基生，葉片劍形或戟形，先端銳尖，長(cháng)1 5—45cm，全緣，葉柄長(cháng)，鮮綠色有光澤�；ㄇo基生，高與葉相近，頂端著(zhù)生一肉穗花序，包于佛焰苞內，怫焰苞喇叭狀，先端長(cháng)尖，長(cháng)可達15 25cm，下部呈短筒狀，上部展開(kāi)，形似馬蹄。馬蹄蓮以其獨特的佛焰苞和優(yōu)美挺拔的莖葉深受人們的喜愛(ài)。目前，許多彩色馬蹄蓮品種應用越來(lái)越廣泛�，F在栽培品種有很多，如‘圣紅’佛焰苞深玫瑰紅色；‘黑魔’佛焰苞鮮黃色，基部有黑色斑蜘‘財富’佛焰苞橙紅色；‘粉信’佛焰苞粉橙色；‘基安蒂’佛焰苞紅葡萄酒色；‘黑眼’佛焰苞淡黃色，基部有明顯的大黑色斑蜘‘玫尼特’佛焰苞鮮黃色；‘颯莫斯’絳紅色佛焰苞外又具有彩色大苞片，成重苞花等。隨著(zhù)品種的增多和需求的增加，傳統的繁殖方法已經(jīng)滿(mǎn)足不了人們的需求。目前，馬蹄蓮的組織培養及規�；�生產(chǎn)的技術(shù)體系已經(jīng)應用于生產(chǎn)，對加速良種馬蹄蓮的推廣利用起到了較大的作用。本文將簡(jiǎn)單介紹彩色馬蹄蓮組織培養工廠(chǎng)化生產(chǎn)技術(shù)。

成本核算

在進(jìn)行工廠(chǎng)化生產(chǎn)之前有一個(gè)至關(guān)重要的問(wèn)題就是成本核算。因為組織培養需要大量的人力、物力和財力，生產(chǎn)成本一般比常規方法高。一般可以用以下方法來(lái)降低成本：

1．充分發(fā)揮設備的生產(chǎn)潛力，提高組培苗的產(chǎn)量；

2．提高生根率到90％以上，移栽成活率在40％以上；

3．節約用電，降低能耗；

4．適當提高增殖系數和繼代系數；

5．抓住商機，開(kāi)拓市場(chǎng)。

工廠(chǎng)化生產(chǎn)流程

組織培養的車(chē)間條件  馬蹄蓮組織培養的工廠(chǎng)化生產(chǎn)應具備如下車(chē)間：洗滌車(chē)間、培養基配制分裝車(chē)間、消毒間、儲備室、按種車(chē)間和培養車(chē)間。要進(jìn)行周年生產(chǎn)還應具有溫室和大棚。通過(guò)這些車(chē)間的共同工作可實(shí)現組培苗的流水線(xiàn)生產(chǎn)。目前已經(jīng)有經(jīng)改造過(guò)的培養基分裝設備，可實(shí)現培養基的自動(dòng)分裝，而且成本不高，不但可以節省人力，還可以節省財力。接種車(chē)間應配有緩沖間，要求有超凈工作臺，使用前要先開(kāi)機10mirl，目的是用紫外線(xiàn)滅菌。培養車(chē)間要求可以控制光照時(shí)間和光照強度，最好既要有自然光照還要有補光設備。沒(méi)有特殊要求時(shí)用自然光可以節約電能降低成本。溫室和大棚是組培苗馴化和生長(cháng)成商品的地方，由于馬蹄蓮生長(cháng)適溫白天為15℃一24℃，夜間白花馬蹄蓮最低溫度為13℃，紅花和黃花品種最低溫度為16℃，冬季越冬溫度要大于5℃，因此要求溫室和大棚要有遮光設施以遮去夏季的強光。

溫室或大棚中進(jìn)行滅菌  馬蹄蓮組織培養中污染率高一直是一個(gè)有待解決的難題，若要降低污染率，可將彩色馬蹄蓮的球莖用殺菌劑進(jìn)行處理，殺菌劑可用溫室常用的多菌靈50％可濕性粉劑。不同稀釋倍數的多菌靈處理時(shí)間不一樣，一般用2000倍液處理，不超過(guò)8小時(shí)，成活率可達70%，具體方法是將外植體的塊莖浸泡在多菌靈中。此種方法操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、副作用小。還有一種方法是將彩色馬蹄蓮的母球洗凈后，用蛭石進(jìn)行無(wú)土栽培，根據季節條件在溫室或大棚內培養一個(gè)月后，切取0．5一l cIll的生長(cháng)芽，用0．1％的NaCI()滅菌10mm即可用于接種。實(shí)驗證明經(jīng)過(guò)預培養的彩色馬蹄蓮的球莖，在相同的滅菌時(shí)間下(其中以10min效果最好)污染率僅為20％，成活率可以達到750,‘以上。

培養基配制分裝車(chē)間進(jìn)行培養基的配制分裝  馬蹄蓮的組織培養中可用塊莖作外植體．初代培養時(shí)．塊莖在培養基MS+6BA2．0mg�！�L一＼土土0．5mg，。L中產(chǎn)生的叢生芽及愈傷組織最多、速度最快。

MS培養基的配方可參考具體方法如下：

(1)母液A、B、C、D的配制，按表1稱(chēng)取藥品，將其溶解在蒸餾水中，定容至500ml。

(2)母液E的配制：將Nm—EDTA完全溶解后加FeS()n·7H z0溶解或將Na2一EDTA和FeSC)4·7H20分別溶解再相互溶合，定容為500ml，在遮光的褐色瓶?jì)�，貯存在冷藏室內。

(3)母液F制成高濃度液備用，貯存在冷藏室內。

每種激素必須單獨配成母液，用時(shí)根據需要取用。另外，多數激素難溶于水，要先溶于可溶物質(zhì)，然后才能加水定容。它們的配法如下：將IBA先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容到一定濃度。

NAA可先溶于熱水或少量95％的酒精中，再加水定容到一定濃度。

    6一BA先溶于少量1mol／L的HCl中再加水定容。

配制好的母液瓶上應分別貼上標簽，注明母液名稱(chēng)、配制倍數、日期及配lL培養基時(shí)應取的量。

在生產(chǎn)實(shí)踐中，由于工廠(chǎng)化生產(chǎn)需要大量的培養基，因此可以根據以上配制原則，根據需要按比例和一定的濃度配制出大量的培養基，然后可用培養基分裝裝置，分裝在試管或錐形瓶里。

消毒車(chē)間內對培養基進(jìn)行消毒將封裝好的培養基放在專(zhuān)用的滅菌容器里，例如高壓鍋中進(jìn)行滅菌，在操作時(shí)首先要檢查一下是否放了足量的水，以免造成空燒或干鍋現象，然后將培養基保持直立狀態(tài)，依次碼入鍋中，注意容器與容器不要靠得太近，這樣滅菌的效果更好。關(guān)閉鍋蓋加熱，使鍋內壓力上升到0．5kg／cm2，然后打開(kāi)氣閥，排出冷空氣，關(guān)閉放氣閥，待上升到0．5kg／cm2時(shí)，再次開(kāi)啟放氣閥一次，使冷空氣徹底放掉，關(guān)閉放氣閥，使壓力穩定在1．1kg／cm。，即溫度為121℃的條件下，維持15—20min。切斷熱源。自然下壓后，再開(kāi)啟放氣閥。取出滅菌后的培養基放在干凈的柜中。

接種車(chē)間對彩色馬蹄蓮塊莖進(jìn)行接種  切取彩色馬蹄蓮的塊莖，接種在已消毒的培養基上，操作時(shí)要注意

以下幾點(diǎn)：

(1)組織培養常用的接種工具和試劑有鑷子、剪刀、解剖刀、酒精燈、消毒劑、無(wú)菌水等。這些工具在使用前必須嚴格消毒。

(2)接種前，無(wú)菌室要用紫外燈或化學(xué)殺菌劑消毒，紫外燈照射要毛E30mirL以上。在進(jìn)行室內消毒時(shí)要注意人身安全和過(guò)敏反應。

(3)接種工作在超凈工作臺上進(jìn)行，接種前超凈工作臺應預先工作1 5min以上。操作人員應在緩沖室內換好經(jīng)過(guò)消毒的衛生服，戴上口罩。接種時(shí)用酒精棉認真擦洗臺面和手指(尤其是指縫和指甲)，盛外植體的燒杯和培養皿也要用酒精消毒。

(4)經(jīng)過(guò)高壓滅菌的接種工具先用75％的酒精棉擦洗，再用酒精燈火焰灼燒，然后使其自然冷卻。

(5)接種時(shí)培養瓶瓶口要在酒精燈火焰附近，并在接種前后灼燒瓶口。夾取外植體時(shí)用力要適當。用鑷子夾取外植體放入瓶?jì)葧r(shí)，不要碰瓶口。外植體和手指切勿碰到瓶口。

(6)接種過(guò)程中要將用過(guò)的鑷子、解剖刀經(jīng)常在酒精燈上灼燒滅菌；解剖臺也要經(jīng)常用燃燒的酒精棉球擦拭滅菌。接種過(guò)程中盡量不要說(shuō)話(huà)，以防止細菌夾帶在氣流中進(jìn)入培養容器。接種后要在酒精燈上灼燒瓶口和封口紙，并迅速封口。操作要規范、準確、迅速。

接種后將材料送入培養車(chē)間進(jìn)行培養，培養車(chē)間最重要的就是溫度因子和光照因子，因此不但要有控溫設備而且要有補光設備和自然光，這樣才能保證組培苗的質(zhì)量。彩色馬蹄蓮要求培養車(chē)間的條件是溫度27℃±1℃，每天光照16小時(shí)，光照強度20001ux。當產(chǎn)生了大量的愈傷組織后就可以進(jìn)行繼代培養和生根培養。

繼代培養  通過(guò)初級培養已產(chǎn)生愈傷組織，為使愈傷組織進(jìn)一步增殖需進(jìn)行增殖培養，需調整培養基中激素的含量，經(jīng)大量的實(shí)踐證明，培養基：MS+6BA2．0mg／L+NAA0．：3rag／L是誘導愈傷組織分化出芽的最理想的培養基。經(jīng)此培養基的培養，不定芽的增殖較多，芽垂直生長(cháng)雖然較慢，但葉色濃綠、植株粗壯。

生根培養  當繼代生長(cháng)培養基中分化的幼苗高約2—3cm時(shí)，將無(wú)根苗轉移到生根培養基中進(jìn)行生根培養。生根培養基為MS+NAA0．5mg／L+IBA—Na0．3mg／L。經(jīng)生根培養基的培養，幼苗生長(cháng)旺盛、根短而粗、分布均勻，白色最長(cháng)可達5cm，植株葉色濃綠。

繼代培養和生根培養時(shí)要更換培養基，因此要求培養基配制分裝車(chē)間協(xié)調好各培養基的生產(chǎn)。繼代培養和生根培養也要在接種車(chē)間內進(jìn)行，并且繼代和生根的組培苗要放在培養車(chē)間進(jìn)行培養，因此在這幾個(gè)車(chē)間里可進(jìn)行分區管理。

利用溫室和大棚對彩色馬蹄蓮進(jìn)行馴化和移植培養出來(lái)的組培苗要想走出培養室，能在外界正常地生長(cháng)，還必須經(jīng)過(guò)一個(gè)馴化階段，讓組培苗逐漸適應外界的環(huán)境。馴化的具體方法是在培養車(chē)間內打開(kāi)培養瓶蓋，在室溫下煉苗l_2天，使之適應外界的變溫環(huán)境。經(jīng)過(guò)煉苗處理后的試管苗即可進(jìn)行移植。移植前要充分考慮馬蹄蓮生長(cháng)習性。馬蹄蓮喜溫暖濕潤的環(huán)境，不耐寒，怕日光暴曬。生長(cháng)適溫為：10月至翌年3月，需溫度13℃一19℃，3月至10月為19℃一25℃，根據組培的不同時(shí)期可以調整栽培方法。如果組培苗要在冬季或較冷的時(shí)候進(jìn)行移植，則應利用溫室來(lái)實(shí)現周年生產(chǎn)，如果在夏季或較暖的時(shí)候則可利用大棚進(jìn)行移植，這樣可以大大降低成本。溫室或大棚內的濕度要在80％一9 0％左右，光照約20001ux。

移植前還要對栽培基質(zhì)進(jìn)行滅菌。實(shí)踐證明，用蛭石作栽培基質(zhì)有利于幼苗的生長(cháng)，幼苗生根最為旺盛�？蓪⒂酌绨�5cm×5cm株行距進(jìn)行栽植。移栽一個(gè)月內，注意保水和遮蔭。一個(gè)月后，幼苗開(kāi)始迅速生長(cháng)，可適當增強光照，并輔助噴施葉面肥。幼苗移栽以春、夏季成活率高，且生長(cháng)期長(cháng)，休眠時(shí)已形成2 3cm小塊莖。休眠后挖出塊莖，放于陰涼通風(fēng)處貯藏，翌年春季經(jīng)500nlg／L赤霉素浸泡處理10rain，然后正常栽培，5 6月即有少部分塊莖開(kāi)花；其他需再培養一年，長(cháng)成直徑5—8cm的大塊莖。這樣，可以達到植株生長(cháng)整齊、長(cháng)勢快、產(chǎn)花多、質(zhì)量好、花色純的效果，并能保持原有品種特性。

馴化時(shí)還要注意以下幾點(diǎn)：

(1)溫度控制：馴化初期溫度應接近培養室溫度，幾天后馴化溫度逐漸接近自然溫度；

(2)濕度控制：最初保持較高的相對濕度，然后逐漸降低空氣相對濕度，但由于彩色馬蹄蓮喜濕潤環(huán)境，濕度要保持在80%一90%左右；

(3)光照控制：彩色馬蹄蓮忌陽(yáng)光直射，為保持水分平衡應采取必要的遮光措施；

(4)防止雜菌侵染及病害：由于彩色馬蹄蓮喜濕潤的環(huán)境，因此也有利于軟腐病等病害的發(fā)生。個(gè)別植株發(fā)病時(shí)，應及時(shí)拔除病株，并用2000倍液的福爾馬林對土壤消毒，噴灑波爾多液防止擴散。發(fā)生蚜蟲(chóng)危害時(shí)可噴灑40~‘氧化樂(lè )果1 500—2000倍液防治，并注意改善通風(fēng)條件。

經(jīng)馴化后組培苗具有了一定的適應能力可以直接用于切花和盆花生產(chǎn)。

切花生產(chǎn)

彩色馬蹄蓮的生產(chǎn)周期為6個(gè)月，因此可以利用組培苗和溫室大棚來(lái)實(shí)現彩色馬蹄蓮的周年生產(chǎn)。

栽植每床可栽3 4行，以品字形裁種較好，有利于株問(wèn)的通風(fēng)。栽植密度習品種高矮、生長(cháng)勢的旺盛程度及種球的大小而不同。以塑料大棚生產(chǎn)彩色馬蹄蓮，667m。約用種球3000球；露地栽等的不超過(guò)5000球。栽植深度取決于塊莖大小，3—9cm不等，種植塊莖時(shí)應將生長(cháng)點(diǎn)朝上。彩色馬蹄蓮的溫室栽培、露地栽培的種植密度可參照表2。

栽培管理

(1)水：大白花栽培種(品種)喜充足水分，塊莖栽種后澆透水，以后生產(chǎn)地也要保持潮濕；溫室(大棚)栽培的，四周地面也應經(jīng)常灑水，以提高環(huán)境的濕度，操作中要防止肥水灌入葉鞘中引起腐爛。而彩色馬蹄蓮則用水量不可過(guò)大，只在基質(zhì)或基部干燥時(shí)才澆透水，如果栽培基質(zhì)潮濕，澆水就應適度；澆水的原則是次多、量少，在初期生長(cháng)階段，即在第一張葉片完全發(fā)育時(shí)，可用滴灌法，每周澆水控制在幾次；以后，僅用少量水保持植株不受干燥；澆水時(shí)間以上午為好。國外生產(chǎn)中多用滴灌補充水分。

(2)溫度：溫室栽培中，土壤溫度保持15℃～18℃(越穩定越好)；空氣最低溫度為15℃，溫室溫度低，延長(cháng)植株生長(cháng)發(fā)育的時(shí)間，可使莖的高度增加；視氣溫情況，控制好土壤溫度，不能超過(guò)20℃，否則易遭受歐文氏桿菌感染。當植株達到合適的高度，春、秋季溫室中夜間溫度可降到16℃，以減緩植株生長(cháng)，可使橙、紅、粉色品種佛焰苞顏色增強。

(3)光照：馬蹄蓮喜中一高度光照，以2。70001ux為宜，在春、秋季節，適當提高光的強度對花的質(zhì)量和產(chǎn)量都至關(guān)重要。在夏季可遮30％陽(yáng)光，防止土壤溫度升高及植株變矮。低光會(huì )使花苞褪色；短光照會(huì )降低植株高度，反之長(cháng)日照能增加植株的高度。

(4)營(yíng)養：追肥可每月施用兩次200×10一a的低氮、高鉀的液肥；適量的施肥有利于降低歐文氏桿菌感染的危險。

(5)疏葉處理：生長(cháng)開(kāi)花旺盛期，葉片繁茂達到擁擠程度時(shí)，就應及時(shí)疏葉。將外部枯老的葉子自基部剪除，保持株間通風(fēng)良好，促進(jìn)新花莖不斷抽生，可提高產(chǎn)花量。

采花  白色馬蹄蓮當佛焰苞先端向下傾，色澤由綠轉白時(shí)，為采收適期；彩色馬蹄蓮在佛焰苞著(zhù)色良好，第一天開(kāi)始產(chǎn)生花粉時(shí)，為適宜采收期。采收應在每天最涼爽時(shí)進(jìn)行，植株不能潮濕，但植株體內應含有充足的水分。為此，收花期應每3—4天澆水一次。采收方式是將莖直接從塊莖中拔出，若從基部剪斷，則會(huì )影響下一朵花的抽出。拔出后隨即放在盛有清水(內有含氯藥片)的桶中，并置于6℃一8℃貯藏室1小時(shí)后，再行扎束、處理銷(xiāo)售。

盆花生產(chǎn)

上盆  即將培養出來(lái)的幼苗栽植在花盆中。上盆時(shí)要在盆底放入碎瓦片等排水物，上面再填一層培養土，以待栽苗。栽植完畢后，充分澆水，放在遮蔭處緩苗數日。

換盆  隨著(zhù)馬蹄蓮的生長(cháng)，需要從小盆換到大盆。應按植株發(fā)育的大小逐漸換到大盆，如果一下?lián)Q到較大的盆，會(huì )影響根系的生長(cháng)和水分的調節。

倒盆及松盆土  經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的生長(cháng)，馬蹄蓮的株幅逐漸增加，造成株問(wèn)擁擠，這就需要加大盆間的距離，以改善通氣和透光條件，也可以使馬蹄蓮的生長(cháng)均勻一致。如果在澆水后盆土出現板結的現象，就需要松盆土，使空氣流通，植株生長(cháng)良好。同時(shí)可以除去土面的青苔和雜草。

施肥栽植前要施足基肥�；�肥以充分腐熟的餅肥、豬廄肥為好。除栽植前施基肥外，從5月份每10一15天追施一次液肥�；ㄆ谕Ｖ棺贩屎蛧娝�。肥料可用腐熟的餅肥水，生長(cháng)旺季可每隔10天左右增施一次氮鉀混合的稀薄液肥。施肥時(shí)切忌將肥水澆入葉鞘內，以免引起腐爛。

澆水  彩色馬蹄蓮喜歡濕潤環(huán)境，因土壤需保持較高的含水量，所以生長(cháng)期需經(jīng)常澆水，并且早、晚用水噴灑花盆周?chē)�地面，以增加濕度，最�?/SPAN>5—7天用海綿沾水揩抹葉面，以保持葉片新鮮清潔。

光照管理  幼苗時(shí)，在有散射光處養護，注意不要直接日曬，也不可全部蔽蔭�；ㄆ谛枰�充足的光線(xiàn)，光線(xiàn)不足佛焰苞常變成黃綠色，降低觀(guān)賞價(jià)值。但在夏季要遮去強烈的直射光。

盆花的周年生產(chǎn)馬蹄蓮于12月份開(kāi)始開(kāi)花，2—4月為開(kāi)花盛期，花期可延續到5月份。5月至7月，進(jìn)入休眠期，應少澆水，可將盆移到室外，并盡量為其創(chuàng )造一個(gè)較為干燥的環(huán)境，使盆側放，免積雨水，以防腐爛。待葉片全部枯黃后，取出塊莖，置于通風(fēng)陰涼處貯藏，待秋季栽植前將大小塊莖分級分別栽植，大球開(kāi)花，小球養苗，如果不讓馬蹄蓮休眠，可干6月下旬將其放置到完全遮蔭且通風(fēng)極好的地方養護。每天中午、下午都要向地面噴水2—3次，以降低溫度，在白天氣溫不超過(guò)30℃的情況下，馬蹄蓮仍可繼續開(kāi)花。一般lO月份寒露前，將馬蹄蓮移入溫室，控制澆水，保持室溫不低于10℃。春節前便可以開(kāi)花，每周用接近室溫的清水洗葉面一次，保持葉片清新鮮綠。如空氣干燥時(shí)，應用水向花盆四周?chē)婌F增濕。冬季注意增加光照。為促進(jìn)提早開(kāi)花，可提前澆2次稀薄肥水。這樣就可利用溫室來(lái)進(jìn)行馬蹄蓮盆花的周年生產(chǎn)。

馬蹄蓮的工廠(chǎng)化生產(chǎn)是一個(gè)很復雜的過(guò)程。這個(gè)過(guò)程包括很多環(huán)節，每一個(gè)環(huán)節都需要大量的人力、物力以及財力。因此在進(jìn)行工廠(chǎng)化生產(chǎn)時(shí)，要充分考慮可能遇到的每一個(gè)問(wèn)題。只有在組織培養時(shí)科學(xué)嚴謹，生產(chǎn)時(shí)高效高質(zhì)，銷(xiāo)售時(shí)緊抓商機，才能充分發(fā)揮組織培養在規模生產(chǎn)上的優(yōu)勢，才能取得更大的效益。